A　simple,　rapid　and　low-costing　new　mixed　surfactant　MEKC　method　has　been　developed　for　the　analysis　of　five　neutral　anabolic　steroids　in　this　paper.　It　was　found　that　the　bile　salt　coupling　with　Triton　X-100　was　a　suitable　bi-micellar　surfactant　for　the　separation　of　these　anabolic　steroids　with　similar　structure.　The　separation　conditions　were　optimized　in　detail.　The　five　natural　and　synthetic　anabolic　steroids,　such　as　androstenedione　(AD),　19-norandrostenedione　(NAD),　1,4-androstadiene-3,17-dione　(ADD),　methandrostenolone　(MA)　and　methyltestosterone　(MT)　were　separated　and　detected　in　an　alkaline　buffer　system　(pH　9.0)　containing　15　mM　Britton-Robinson　(BR)　buffer,　50　mM　sodium　cholate　(SC)　and　0.1%　(v/v)　Triton　X-100　with　detection　wavelength　at　241　nm　and　18　kV　of　separation　voltage.　Under　the　optimal　conditions,　five　coexistence　neutral　steroids　were　completely　separated　within　12　min　with　the　detection　limits　ranged　from　0.20　to　0.51　μg/mL.　This　method　was　successfully　used　for　detection　and　confirmation　of　the　anabolic　steroid　methandrostenolone　in　methandrostenolone　tablets　and　in　the　real　human　urine,　GC-MS　method　was　applied　to　confirm　the　free　methandrostenolone　existence　in　the　urine　sample　in　order　to　validate　the　reliability　of　MEKC　method.　©　2008　Elsevier　B.V.　All　rights　reserved.