A　rapid　and　efficient　high　performance　liquid　chromatography-tandem　mass　spectrometry　method　was　established　for　the　analysis　of　steroid　hormones　in　fish　flesh.　The　conditions　for　chromatographic　separation　and　triple-quadrupole　mass　spectrometry　detection　were　optimized.　Baseline　separation　was　achieved　for　most　of　the　substances　within　20　min　using　a　Hypersil　GOLD　C18　column　(150　mm×2.1　mm,　i.d.　5　μm)　and　gradient　elution　with　methanol-water　(containing　0.1%　formic　acid,　V/V,　%).　Most　compounds　were　baseline　separated　in　20　min.　Electrospray　ionization　in　positive　ion　mode　with　selective　ion　pairing,　along　with　the　retention　time　and　characteristic　ion　pairs　of　the　target　compound,　was　used　for　qualitative　and　quantitative　analyses　of　16　steroid　hormones.　The　results　showed　that　all　compounds　had　a　good　linear　range　of　0.10~3000.00　ng/mL,　with　correlation　coefficient　R　greater　than　0.9987　and　limit　of　detection　in　range　of　0.05~5.00　ng/mL.　Fish　flesh　was　ground　into　powder　in　liquid　nitrogen,　and　the　latter　was　purified　by　solid　phase　extraction.　The　hydrocortisone　drug　residue　in　fish　powder　was　48.00　ng/g.　The　recoveries　of　16　steroid　hormones　were　in　range　of　82.84%~115.10%,　with　the　RSD　values　lower　than　9.30%.　This　method　had　high　separation　power　and　high　sensitivity,　and　is　suitable　for　simultaneous　determination　of　steroid　hormones　in　aquatic　products.　©　2019,　Editorial　Board　of　Modern　Food　Science　and　Technology.　All　right　reserved.