A　fluorescence　resonance　energy　transfer　(FRET)-based　in　situ　fluorescence　signal　amplification　strategy　is　described　for　the　determination　of　tyrosinase　(TYR).　In　this　assay,　a　dual-templated　copper　nanocluster　(CuNCs)　stabilized　by　bovine　serum　albumin　(BSA)　and　glycylglycine　(Gly-Gly)　was　used　as　an　energy　donor.　Metyrosine　was　employed　as　a　TYR　substrate　because　its　enzyme　catalytic　product　(methyldopa)　was　able　to　function　as　a　monomer　molecule　to　form　fluorescent　polymethyldopa　(PMeDP)　with　the　assistance　of　BSA/Gly-Gly　CuNCs.　In　this　process,　PMeDP　can　combine　with　BSA/Gly-Gly　CuNCs　without　extra　modification　and　then　acts　as　an　energy　receptor,　which　leads　to　a　remarkable　FRET　from　BSA/Gly-Gly　CuNCs　to　PMeDP.　Interestingly,　the　fluorescence　intensity　of　PMeDP　was　strengthened　greatly　in　the　FRET-based　sensor　compared　to the　separate　excitation,　which　provided　good　sensitivity　for　TYR　sensing.　Illuminated　under　a　UV　light　source,　the　fluorescence　signal　change　is　observed　from　dark　violet　to　bright　green.　Therefore,　the　present　sensing　system　affords　a　reliable　ratiometric　assay　for　TYR　determination.　Also,　the　ratio　of　fluorescence　intensity　between　PMeDP　(λem　at　505 nm,　F505)　and　BSA/Gly-Gly　CuNCs　(λem　at　415 nm,　F415)　was　used　for　quantitative　determination　of　TYR.　The　sensing　system　was　easily　operated　in　aqueous　media　with　an　exciting　detection　limit　of　44.0 U L−1.　This　sensing　strategy　has　been　applied　to the　screening　of　inhibitors.　[Figure　not　available:　see　fulltext.].　©　2020,　Springer-Verlag　GmbH　Austria,　part　of　Springer　Nature.