A　high　level　of　folate　receptor　(FR)　expression　is　found　frequently　in　numerous　human　cancerous　cells,　and　monitoring　of　the　FRs　level　is　important　for　the　diagnosis　and　treatment　of　cancers　and　chronic　inflammatory　diseases.　In　this　study,　a　simple　but　sensitive　fluorescent　biosensor　for　FR　detection　in　cancer　cells　has　been　proposed,　which　combines　the　desirable　specificity　of　terminal　protection　and　high　amplification　efficiency　of　hyperbranched　rolling　circle　amplification　(HRCA).　Single-stranded　DNA　(ssDNA)　terminally　tethered　to　folic　acid　(FA)　can　specifically　bind　with　FR,　and　therefore　be　protected　from　degradation　by　exonuclease　I　(Exo　I).　The　protected　ssDNA　can　hybridize　with　the　padlock　probe　and　initiate　the　HRCA　reaction.　In　contrast,　ssDNA　will　be　degraded　by　Exo　I　and　no　probe　is　left　to　trigger　the　HRCA　reaction　without　the　protection　of　the　target　FR.　The　products　of　HRCA　contain　a　large　amount　of　double-strand　DNA　(dsDNA)　and　a　strong　fluorescence　signal　can　be　detected　after　the　addition　of　SYBR　Green　I.　The　enhanced　fluorescence　intensity　has　a　linear　relationship　with　the　logarithm　of　FR　(standard　solution)　concentration　ranging　from　0.18　fM　to　22　pM　with　a　detection　limit　of　0.06　fM.　Moreover,　the　proposed　biosensor　has　been　applied　to　detect　FR　in　cancer　cells　(HeLa　cells　as　an　example).　The　enhanced　fluorescence　intensity　has　a　linear　dependence　on　the　logarithm　of　cell　concentration　in　the　range　of　50-5000　cell　per　mL.　This　biosensor　has　potential　applications　in　the　area　of　early　cancer　diagnosis.　©　The　Royal　Society　of　Chemistry　2016.