甘露聚糖酶是一类能够水解β-1,4-甘露糖苷键的内切半纤维素水解酶类,其在饲料、石油、洗涤行业中已经得到了实际应用,并在造纸、食品、纺织等领域具有巨大的应用潜力.本文对产甘露聚糖酶的海洋微生物进行筛选、鉴定、诱变育种、产酶条件和酶学性质的研究,具体研究结果如下:
　　　　1.以从台湾海峡采集的海水、海泥等样品为实验材料,采用4种分离培养基,分离得到细菌127株,霉菌5株,放线菌3株;采用点种、平板透明圈法从中筛选到16株产甘露聚糖酶的菌株;再通过发酵复筛,采用DNS法测酶活力,从中筛选出一株甘露聚糖酶活力较高的菌株B555.
　　　　2.经过形态特征观察、生理生化试验及16S　rDNA序列分析，鉴定菌株B555为芽孢杆菌属(Bacillus　sp.　)。
　　　　3.以菌株B555为出发菌株，通过紫外、紫外-氯化锂、微波-氯化锂诱变得到菌株LW9,其产酶活力提高到209.9　U/mL，为出发菌株B555酶活力的7.04倍;经过6代传代，证明其遗传性质稳定。
　　　　4.采用单因子实验、Plackett-Burman设计和响应曲面法对菌株LW9产甘露聚糖酶的培养基和培养条件进行了优化。优化后培养基配方为:魔芋粉7.4g/L，蛋白胨11.5g/L，KH2P041　g/L,　NaCl　20　g/L,　MgCl2·6Hz0　2mmol/L,　pH　7.0;优化后培养条件为:摇床转速200　r/min,装液量50　mL/250　mL，培养温度30℃，接种量3％。在上述条件下培养30　h，菌株LW9的酶活力达到了435.7　U/mL，是优化前酶活力的2.07倍，为原始出发菌株B555的15.5倍。
　　　　5.利用硫酸铵盐析对芽孢杆菌LW9所产甘露聚糖酶进行了初步纯化，纯化倍数为1.59倍，回收率为6.94　%。菌株LW9所产甘露聚糖酶的最适作用pH为7.0;在pH　6.0，相对酶活力为最大酶活力的87.3%;在pH　5.0～9.0，相对酶活力可保持40%以上;在pH　5.0～10.0,30℃保温2h后仍可保持最大酶活力的50%以上。最适作用温度为55℃，在60℃～65℃，相对酶活力可保持80%以上;在55℃，半衰期为150　min。金属离子Ni+、Zn2+、Mg2+、Ca2+、　Na+、K+、Fe3+、Ba2+对酶活力均有抑制作用。以槐豆胶为底物时，Km值和Vm分别为4.7mg/mL和588.23μmol/(mL·min)，以魔芋粉为底物时，Km值和Vm分别为3.33mg/mL和476.19μmol/(mL·min)。