目的：抗冻蛋白具有抑制冰晶生长、减少细胞损伤及保持产品原有组织结构、质地和品质的特点，本研究旨在利用多种分离手段获得一种天然、安全、高活性的抗冻多肽并对其细菌低温保护活性进行研究.方法：利用热水抽提法提取鲨鱼皮胶原蛋白，酶法水解后以细菌低温保护活性为指标筛选最适宜蛋白水解酶及酶解时间，利用SephadexG-50凝胶过滤色谱、SP-Sephadex　C-25强阳离子交换色谱等分离手段进行分离，得到细菌低温保护活性高的部分.结果：酶解鲨鱼皮胶原蛋白得到高活性抗冻多肽的最适蛋白水解酶为酸性蛋白酶，酶解条件为：酶解温度50℃、pH　3.0、酶/底物3000　U/g、底物浓度3％、酶解时间lh；经过SephadexG-50凝胶过滤色谱、SP-Sephadex　C-25强阳离子交换色谱等分离手段得到阳离子的P2组分，经过细菌低温保护实验，当浓度为500　μg/mL时，大肠杆菌的存活率达到80.8％.结论：分离得到的抗冻多肽具有较高的抗冻活性并且具有很高的安全性，可以应用于食品医药等产业中.