实验哺乳动物模型是研究基础生物学及人类疾病的重要工具,对实现转基因操作,尤其是基因敲入(knock-in,KI),具有重大意义.锌指核酸酶(zinc-finger　nucleases,ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶(transcription　activator-like　effector　nucleases,TALEN)和RNA介导的、基于成簇的规律间隔的短回文重复序列和Cas9蛋白的DNA核酸内切酶[clustered　regulatory　interspaced　short　palindromic　repeat　(CRISPR)/Cas9-based　RNA-guided　DNA　endonucleases,CRISPR/Cas9]等的出现,为科研工作者提供了革命性的转基因操作工具.这些可编辑核酸酶通过在靶标序列位置产生双链断裂缺口(double　strand　breaks,DSBs),并在同源修复模板存在的情况下发生同源重组,进而实现精确的基因敲入.该文主要综述了这些技术的原理及其在哺乳动物KI中取得的最新进展、提高KI效率以及降低脱靶效应的举措等,将有助于KI技术在未来转基因实践中的广泛应用.