建立了一种快速高效的液相色谱-串联质谱法分析鱼肉中类固醇激素。实验优化了色谱分离条件和三重四级杆质谱检测参数。采用Hypersil　GOLD　C18色谱柱(150　mm×2.1　mm,i.d.5μm),甲醇-水(含0.1%甲酸,V/V,%)为流动相进行梯度洗脱,在20min内基本实现了大部分物质基线分离;在电喷雾正离子和选择离子对模式下,结合目标物保留时间和特征离子对信息,对16种激素进行定性和定量分析。结果表明,所有化合物具有良好的线性范围(0.10~3000.00ng/m　L),相关系数R大于0.9987,检测限介于0.05~5.00ng/m　L范围内。鱼肉样品在液氮中研磨成鱼粉,经过固相萃取法净化处理后,测得氢化可的松药物残留为48.00ng/g。16种激素的回收率介于82.84%~115.10%之间,RSDs值小于9.30%。该法分离能力强、灵敏度高,适用于水产品中类固醇药物的多残留同时测定。