Abstract:
目的:初步探究神经元正五聚体1(neuronal pentraxin 1,NPTX1)基因对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)成骨分化调控的作用机制.方法:将hBMSCs进行成骨诱导培养,在不同的时间点(0、3、7、10、14 d)收集RNA,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)技术检测成骨分化调控相关的Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)以及 NPTX1 的 mRNA 表达水平.通过构建 NPTX1 shRNA慢病毒并感染hBMSCs,建立NPTX1稳定敲减的hBMSCs细胞系;采用ALP染色、茜素红(alizarin red,AR)染色和qPCR等方法检测敲减NPTX1对hBMSCs成骨分化能力的影响.结果:体外诱导hBMSCs成骨分化时,随着成骨诱导时间的延长,与第0天相比,成骨基因RUNX2、ALP和OCN表达量均显著升高,而NPTX1表达量明显降低(P<0.01).慢病毒感染hBMSCs 72 h后,qPCR结果显示NPTX1敲减效率高于60%.hBMSCs敲减NPTX1后,将敲减NPTX1组(shNPTX1组)及其对照组(shNC组)在普通增殖培养基下进行培养后提取RNA,qPCR结果显示和shNC组相比,shNPTX1组的成骨相关基因RUNX2和成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)表达量显著增高(P<0.01).ALP染色试验显示成骨诱导7 d时,shNPTX1组较shNC组显色明显加深;AR染色试验显示成骨诱导14 d时,shNPTX1组较shNC组矿化结节明显增多.结论:NPTX1对hBMSCs成骨分化具有调控作用,且其敲减可促进hBMSCs的成骨分化,该结果提示NPTX1可能成为治疗骨质疏松症等成骨异常疾病的潜在靶点.
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北京大学学报(医学版)
ISSN: 1671-167X
Year: 2025
Issue: 1
Volume: 57
Page: 7-12
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