为探索烟草废弃物多用途应用的潜力及提取方法对多糖结构和功能的影响，通过直接提取和酶制剂辅助提取工艺对烟草废弃物中的多糖进行提取，采用响应面法优化了酶制剂辅助提取的工艺条件，并分析了多糖的结构和抗氧化活性。结果表明：(1)在料液比为1∶32、每克烟草废弃物中纤维素酶添加量为0.455　g（酶活为5　000　U）、酶解温度为62℃及酶解时间为2.0　h条件下，多糖得率最高，为23.56%。(2)直接提取和纤维素酶辅助提取的多糖主要为含有β-构型吡喃环的酸性多糖，且单糖组成相似，纤维素酶辅助提取的多糖呈光滑小颗粒状，聚合度和交联度较低。(3)直接提取和纤维素酶辅助提取的多糖对DPPH和ABTS自由基均具有一定的清除能力，表现出一定的抗氧化活性。该研究为烟草废弃物中多糖的提取、结构表征及其生物活性分析提供了理论支撑，也为烟草废弃物的高值化利用开辟了新途径。