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学者姓名：洪文荣
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Gentamicin C1a is an important precursor to the synthesis of etimicin, a potent antibiotic. Wild type Micromonospora purpurea Gb1008 produces gentamicin C1a, besides four other gentamicin C components: C1, C2, C2a, and C2b. While the previously reported engineered strain M. purpurea GK1101 can produce relatively high titers of C1a by blocking the genK pathway, a small amount of undesirable C2b is still being synthesized in cells. Gene genL (orf6255) is reported to be responsible for converting C1a to C2b and C2 to C1 in Micromonospora echinospora ATCC15835. In this work, we identify the genL that is also responsible for the same methylation in Micromonospora purpurea. Based on M. purpurea GK1101, we construct a new strain with genL inactivated and show that no C2b is produced in this strain. Therefore, we successfully engineer a strain of M. purpurea that solely produces gentamicin C1a. This strain can potentially be used in the industrial production of C1a for the synthesis of etimicin.
Keyword ：
gentamicin C1a gentamicin C1a metabolic engineering metabolic engineering Micromonospora purpurea Micromonospora purpurea N-methyltransferase N-methyltransferase
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| GB/T 7714 | Wei, Zeng , Shi, Xianai , Lian, Rong et al. Exclusive Production of Gentamicin C1a from Micromonospora purpurea by Metabolic Engineering [J]. | ANTIBIOTICS-BASEL , 2019 , 8 (4) . |
| MLA | Wei, Zeng et al. "Exclusive Production of Gentamicin C1a from Micromonospora purpurea by Metabolic Engineering" . | ANTIBIOTICS-BASEL 8 . 4 (2019) . |
| APA | Wei, Zeng , Shi, Xianai , Lian, Rong , Wang, Weibin , Hong, Wenrong , Guo, Shaobin . Exclusive Production of Gentamicin C1a from Micromonospora purpurea by Metabolic Engineering . | ANTIBIOTICS-BASEL , 2019 , 8 (4) . |
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Abstract ：
目的 研究绛红色小单孢菌(Micromonospora purpurea)G1008中抗性基因gmrB与gmrA功能,为阐明庆大霉素生物合成机制奠定基础.方法 以红霉素抗性基因ermE分别置换gmrB和gmrA基因,构建突变株GerB102和GerA102.借助TLC和MS分析突变株代谢产物是否变化,同时检测突变株耐受自身代谢产物的能力是否发生变化.结果 突变株GerB102代谢产物没有发生明显变化,仍主要积累庆大霉素C化合物,而GerA102代谢产物发生变化.庆大霉素耐受性试验结果显示,GerB102和G1008耐庆大霉素浓度达到6000U/mL以上,而GerA102不足50U/mL.结论 gmrB既非庆大霉素生物合成的关键基因,也非关键的抗性基因,而gmrA是庆大霉素抗性的关键基因.
Keyword ：
gmrA基因 gmrA基因 gmrB基因 gmrB基因 基因工程 基因工程 基因表达 基因表达 庆大霉素 庆大霉素
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| GB/T 7714 | 万云凤 , 连榕 , 洪文荣 et al. 庆大霉素生物合成基因簇中抗性基因gmrB及gmrA的功能研究 [J]. | 中国抗生素杂志 , 2018 , 43 (6) : 688-695 . |
| MLA | 万云凤 et al. "庆大霉素生物合成基因簇中抗性基因gmrB及gmrA的功能研究" . | 中国抗生素杂志 43 . 6 (2018) : 688-695 . |
| APA | 万云凤 , 连榕 , 洪文荣 , 石贤爱 . 庆大霉素生物合成基因簇中抗性基因gmrB及gmrA的功能研究 . | 中国抗生素杂志 , 2018 , 43 (6) , 688-695 . |
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ctcK基因 ctcK基因 去甲基金霉素 去甲基金霉素 生物合成 生物合成 甲基化 甲基化 金色链霉菌 金色链霉菌
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| GB/T 7714 | 林龙镇 , 万云凤 , 洪文荣 . 金霉素生物合成基因ctcK的研究 [J]. | 湖南师范大学(自然科学学报) , 2017 , (001) : 37-43,95 . |
| MLA | 林龙镇 et al. "金霉素生物合成基因ctcK的研究" . | 湖南师范大学(自然科学学报) 001 (2017) : 37-43,95 . |
| APA | 林龙镇 , 万云凤 , 洪文荣 . 金霉素生物合成基因ctcK的研究 . | 湖南师范大学(自然科学学报) , 2017 , (001) , 37-43,95 . |
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Abstract ：
来自绛红色小单孢菌G1008的genp与来自橄榄星小单孢菌FOM808的forp,均参与3'',4''-双脱羟基,2个基因属于同工异源酶基因.应用同源重组原理,实现forp替换genp,探索同工异源酶基因异源表达的可能性.以温敏型穿梭质粒pKCl139为我体,构建同源重组质粒pFP4.经接合转移将载体导入到G1008基因组中,利用影印筛选和PCR验证的方法,获得基因重组工程菌FTP2.提取工程菌次级代谢产物,经TLC和MS分析.结果表明,工程菌仍然可以产生庆大霉素C、组分.forp基因的功能得到了体现,外源基因forp实现了异源表达,进一步证实forp是负责参与3'',4''-双脱羟基的功能基因.
Keyword ：
3'',4''-双脱羟基 3'',4''-双脱羟基 forp forp genp genp 异源表达 异源表达 绛红色小单孢菌 绛红色小单孢菌
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| GB/T 7714 | 林共德 , 连榕 , 洪文荣 et al. 同工异源酶基因forp与genp异源表达的研究 [J]. | 宁夏大学学报（自然科学版） , 2017 , 38 (4) : 377-382 . |
| MLA | 林共德 et al. "同工异源酶基因forp与genp异源表达的研究" . | 宁夏大学学报（自然科学版） 38 . 4 (2017) : 377-382 . |
| APA | 林共德 , 连榕 , 洪文荣 , 石贤爱 . 同工异源酶基因forp与genp异源表达的研究 . | 宁夏大学学报（自然科学版） , 2017 , 38 (4) , 377-382 . |
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Abstract ：
研究高产卡那霉素B产业化工程菌的构建.以主产氨甲酰卡那霉素B工程菌——黑暗链霉菌S.tenebrari-us312为出发菌株,进一步敲除氨甲酰磷酸转移酶基因tobZ,获得直接产卡那霉素B的工程菌ST314.对工程菌ST314的生物合成潜力进行研究,在200 L发酵罐上进行放大实验,测定各参数,并绘制发酵代谢曲线.结果表明,该菌株遗传特性稳定,产抗能力得到有效恢复,提高幅度接近2倍;该工程菌产卡那霉素B的能力达到4500 U/mL.黑暗链霉菌ST314的研究可以向产业化生产转移.
Keyword ：
tobZ tobZ 卡那霉素B 卡那霉素B 发酵特性 发酵特性 基因敲除 基因敲除 黑暗链霉菌 黑暗链霉菌
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| GB/T 7714 | 陈晖 , 温淑平 , 洪文荣 . 卡那霉素B工程菌的构建及其发酵特性研究 [J]. | 宁夏大学学报（自然科学版） , 2017 , 38 (1) : 83-89 . |
| MLA | 陈晖 et al. "卡那霉素B工程菌的构建及其发酵特性研究" . | 宁夏大学学报（自然科学版） 38 . 1 (2017) : 83-89 . |
| APA | 陈晖 , 温淑平 , 洪文荣 . 卡那霉素B工程菌的构建及其发酵特性研究 . | 宁夏大学学报（自然科学版） , 2017 , 38 (1) , 83-89 . |
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Abstract ：
研究高产卡那霉素B产业化工程菌的构建.以主产氨甲酰卡那霉素B工程菌——黑暗链霉菌S.tenebrari us312为出发菌株，进一步敲除氨甲酰磷酸转移酶基因tobZ.获得直接产卡那霉素B的工程菌ST314.对工程菌ST314的生物合成潜力进行研究，在200 L发酵罐上进行放大实验，测定各参数，并绘制发酵代谢曲线.结果表明，该菌株遗传特性稳定，产抗能力得到有效恢复，提高幅度接近2倍；该工程菌产卡那霉素B的能力达到4500 U/mL.黑暗链霉菌ST314的研究可以向产业化生产转移.
Keyword ：
tobZ tobZ 卡那霉素B 卡那霉素B 发酵特性 发酵特性 基因敲除 基因敲除 黑暗链霉菌 黑暗链霉菌
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| GB/T 7714 | 陈晖 , 温淑平 , 洪文荣 . 卡那霉素B工程菌的构建及其发酵特性研究 [C] //2017 发酵工程关键技术与工艺装备创新研讨会论文集 . 2017 : 26-32 . |
| MLA | 陈晖 et al. "卡那霉素B工程菌的构建及其发酵特性研究" 2017 发酵工程关键技术与工艺装备创新研讨会论文集 . (2017) : 26-32 . |
| APA | 陈晖 , 温淑平 , 洪文荣 . 卡那霉素B工程菌的构建及其发酵特性研究 2017 发酵工程关键技术与工艺装备创新研讨会论文集 . (2017) : 26-32 . |
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Abstract ：
将依纽小单孢菌3'',4''-双脱羟基基因sisI组合到绛红小单孢菌G1008中,替代其中的同工异源酶基因genP,研究sisI基因异源表达的内在特征.以温敏型质粒pKC1139作为克隆载体,构建sisI替换genP的重组质粒pIP303,利用接合转移技术,将穿梭质粒导入绛红小单孢菌G1008基因组,影印筛选并通过PCR(聚合酶链式反应)鉴定,获得一株基因重组工程菌GIP95.借助TLC(薄层色谱)、HPLC(高效液相色谱)和MS(质谱)检测代谢产物组分及结构变化,结果表明突变株GIP95的代谢流未被阻断,仍能够合成庆大霉素C族组分.由此得出结论,外源基因依纽小单孢菌3'',4''-双脱羟基基因sisI参与了庆大霉素生物合成中绛红糖胺3'',4''-双脱羟基这一关键步骤,在绛红小单孢菌G1008中实现异源表达.
Keyword ：
3'',4''-双脱羟基基因 3'',4''-双脱羟基基因 genP genP sisI sisI 依纽小单孢菌 依纽小单孢菌 绛红小单孢菌 绛红小单孢菌
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| GB/T 7714 | 陈成立 , 林艺辉 , 林共德 et al. sisI替换genP在绛红小单孢菌G1008中的功能表达 [J]. | 延边大学学报（自然科学版） , 2016 , 42 (1) : 23-28 . |
| MLA | 陈成立 et al. "sisI替换genP在绛红小单孢菌G1008中的功能表达" . | 延边大学学报（自然科学版） 42 . 1 (2016) : 23-28 . |
| APA | 陈成立 , 林艺辉 , 林共德 , 洪文荣 . sisI替换genP在绛红小单孢菌G1008中的功能表达 . | 延边大学学报（自然科学版） , 2016 , 42 (1) , 23-28 . |
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Abstract ：
为更好生产单组分庆大霉素C2a,拟构建一株主产庆大霉素C2a的工程菌.通过序列比对分析,锁定genB2为构建该工程菌的关键基因.以绛红小单孢菌G1008基因组为模板,PCR扩增genB2的上下游序列为同源交换臂,构建同源重组质粒pZB303.通过接合转移,将质粒pZB303导入绛红小单孢菌G1008,安普抗性及PCR扩增筛选得到一株genB2框内缺失工程菌GB102.发酵并提取代谢产物,再经TLC,HPLC,MS分析.结果表明,工程菌GB102主要积累庆大霉素C2a.有望用于生产单组分庆大霉素C2a.
Keyword ：
genB2 genB2 庆大霉素C2a 庆大霉素C2a 绛红小单孢菌 绛红小单孢菌
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| GB/T 7714 | 林强 , 陈洲琴 , 阙新桥 et al. 一株主产庆大霉素C2a工程菌的构建 [J]. | 宁夏大学学报（自然科学版） , 2016 , 37 (1) : 90-93,98 . |
| MLA | 林强 et al. "一株主产庆大霉素C2a工程菌的构建" . | 宁夏大学学报（自然科学版） 37 . 1 (2016) : 90-93,98 . |
| APA | 林强 , 陈洲琴 , 阙新桥 , 洪文荣 . 一株主产庆大霉素C2a工程菌的构建 . | 宁夏大学学报（自然科学版） , 2016 , 37 (1) , 90-93,98 . |
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Abstract ：
为探索妥布霉素生物合成过程中糖基转移的作用,对糖基转移酶基因tobM2进行了阻断研究.以妥布霉素生物合成基因簇为模板,构建了同源重组质粒pMB4,通过接合转移将质粒pMB4导入黑暗链霉菌Tt-49,然后利用红霉素抗性筛选并经PCR验证,获得了一株基因tobM2被阻断的工程菌TW402.发酵及代谢产物分析结果表明:工程菌总效价略有下降,约为出发菌株的85％.TLC检测与质谱分析显示,工程菌TW402主产安普霉素,并积累中间产物尼泊拉胺.TobM2转化尼泊拉胺生成妥布霉素,tobM2基因的缺失阻断了妥布霉素的生物合成,获得一株主产安普霉素工程菌.
Keyword ：
tobM2 tobM2 基因阻断 基因阻断 妥布霉素 妥布霉素 黑暗链霉菌 黑暗链霉菌
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| GB/T 7714 | 温淑平 , 陈晖 , 汪洋 et al. 妥布霉素糖基转移酶基因tobM2的研究 [J]. | 延边大学学报（自然科学版） , 2016 , 42 (1) : 39-44 . |
| MLA | 温淑平 et al. "妥布霉素糖基转移酶基因tobM2的研究" . | 延边大学学报（自然科学版） 42 . 1 (2016) : 39-44 . |
| APA | 温淑平 , 陈晖 , 汪洋 , 洪文荣 . 妥布霉素糖基转移酶基因tobM2的研究 . | 延边大学学报（自然科学版） , 2016 , 42 (1) , 39-44 . |
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Abstract ：
庆大霉素生物合成过程中的genP基因和西索米星生物合成过程中的sisⅠ基因属同工异源酶基因,均能催化绛红糖胺3’,4’-双脱羟基反应.本研究借助组合生物合成,探索绛红小单孢菌中的genP基因能否在依纽小单孢菌中表达.首先构建genP基因替换sisⅠ基因的同源重组质粒pKPI4,并经接合转移将其导入依纽小单孢菌TS388中,最后再通过影印筛选及PCR鉴定获得genP基因替换sisⅠ基因的工程菌PTI886.将野生型菌株TS388、sisⅠ基因缺失突变株TII1 102(TS388△sisⅠ)及工程菌PTI886在同等条件下进行发酵,提取其代谢产物并经薄层层析及质谱分析.结果表明,突变株TII1 102不能合成西索米星,而工程菌PTI886仍能继续合成西索米星,且代谢产物组分与野生型菌株TS388相比无明显变化,说明genP基因能在依纽小单孢菌中表达.本研究揭示了同工异源酶基因异源表达的可行性,可为今后不同微生物异源基因组合的研究提供借鉴.
Keyword ：
3'',4''-双脱羟基 3'',4''-双脱羟基 genP基因 genP基因 sisⅠ基因 sisⅠ基因 异源表达 异源表达 组合生物合成 组合生物合成
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| GB/T 7714 | 万云凤 , 洪文荣 , 石贤爱 . genP基因在依纽小单孢菌中表达的分析 [J]. | 石河子大学学报（自然科学版） , 2016 , 34 (5) : 558-564 . |
| MLA | 万云凤 et al. "genP基因在依纽小单孢菌中表达的分析" . | 石河子大学学报（自然科学版） 34 . 5 (2016) : 558-564 . |
| APA | 万云凤 , 洪文荣 , 石贤爱 . genP基因在依纽小单孢菌中表达的分析 . | 石河子大学学报（自然科学版） , 2016 , 34 (5) , 558-564 . |
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