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为进一步提高解淀粉芽胞杆菌α-淀粉酶(Bacillus amyloliquefaciens α-amylase,BAA)发酵生产与应用性能,对BAA编码基因实施了体外随机突变,建立了含有2×104个转化子的BAA突变库.BAA编码基因的突变频率为56％,基因突变效率为2.8/kb DNA,错义突变26.8％;以平板筛选法和摇瓶发酵法对BAA突变库进行筛选,得到6个酶活力显著提高的突变体,其中突变体BAA28的酶活力提高最多,提高达37％;进一步分析突变体BAA28序列,发现其4个氨基酸残基发生突变,分别是:T341P、P348L、T356P和P362L,其中T341P和T356P位于无规卷曲结构中,P348L位于d-螺旋结构中,P362L位于β-折叠结构中.进一步制备与纯化BAA28,并比较分析其酶学特征,与野生型BAA相比,BAA28的离子依赖性、热稳定性发生了显著变化;BAA28的比酶活提高了约31％,κcat/Km值提高了92％.突变体BAA28较BAA在催化与应用属性上有了显著提升,可应用于后续中温α-淀粉酶高产新菌种的构建并可显著改善其工业应用性能.
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食品与发酵工业
ISSN： 0253-990X
CN： 11-1802/TS
Year： 2017
Issue： 10
Volume： 43
Page： 24-29
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