Abstract:
目的:从新鲜莲子中分离纯化出多酚氧化酶并对其酶促反应动力学进行研究,以期在新鲜莲子运输、加工及贮存过程中,对由多酚氧化酶引起的酶促褐变起到一定的控制作用. 方法:采用硫酸铵沉降、AF-Blue HC-650M亲和色谱对莲子多酚氧化酶进行分离纯化;通过SDS PAGE表征其分子量;以邻苯二酚为底物,研究酶促反应动力学,考察其最适反应条件、稳定性及抑制剂作用.结果:从莲子中分离纯化出一种多酚氧化酶(PPO),经SDS PAGE鉴定,其相对分子量为38.6 kDa.以邻苯二酚为底物,莲子PPO的最适反应条件为20℃、pH 7.0,在此条件下测得米氏常数Km及最大反应速率Vm分别为6.04 mM及416.67 U.该酶可在pH 4.0-8.0、温度低于40℃条件下保持稳定,温度高于80℃时活性完全丧失.50mM的硫脲、亚硫酸氢钠、EDTA·2Na、 SDS、柠檬酸、抗坏血酸、硫代硫酸钠会对PPO的活性产生不同程度的抑制作用.金属离子Ba2+、Mg2+、Ca2+、Mn2+、Co2+、Zn2+对酶活性有抑制作用,而20 mM的Cu2+则显著促进该酶活性.结论:从新鲜莲子中分离纯化出一种多酚氧化酶,并对其酶促反应动力学活性进行研究,可为防止新鲜莲子发生酶促褐变提供理论依据.
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Year: 2013
Page: 103-104
Language: Chinese
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