Abstract：
本实验旨在构建能够表达具有天然构象的重组人源铜锌超氧化物歧化酶(SOD)的毕赤酵母工程菌.通过PCR的方法从实验室保存的菌种中获得SOD目的基因后首先连接到pMD-18T载体上构建亚克隆载体，送样测序验证序列无误.对亚克隆载体使用Xho Ⅰ/XbaⅠ两种限制性内切酶进行酶切，获得具有粘性末端的SOD目的基因，用T4连接酶酶连到具有相同粘性末端的表达载体pPICZαA.用Sac Ⅰ单酶切使表达载体线性化，电转化进毕赤酵母表达菌株GSll5.1％甲醇诱导四天后测量酶活，筛选出酶活达530U/ml的菌株.pPICZαA载体上含有前导肽α-factor协助目的蛋白表达后分泌到酵母胞外，同时还有组氨酸标签方便蛋白分离纯化；为了获得SOD的天然构象，在SOD基因前添加AAAAGA两个碱性氨基酸密码子使得SOD蛋白跨膜时酵母细胞膜上的Kex2酶能识别并切除前导肽，在SOD基因后添加终止子进行终止.SDS-PAGE验证诱导后发酵液上清，在22 kDa附近条带随诱导时间加深.蛋白单体分子量和酶活符合设计要求，实验结果显示目的菌株已经构建成功.
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Year： 2012
Page： 140-141
Language： Chinese
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