以黑暗链霉菌Tt-49基因组为模板,妥布霉素生物合成基因tobX-Z为靶基因,利用PCR方法　,扩增靶基因上、下游序列,作为同源交换臂,以温敏型质粒pKC1139为基础,将红霉素抗性基因筛选标记插入其中一个交换臂与载体之间,构建用于阻断黑暗链霉菌Tt-49妥布霉素生物合成的重组质粒pTOB104,该质粒通过E.coli　ETl2567/pUZ8002去甲基化修饰后,经接合转移进入黑暗链霉菌Tt-49,利用红霉素抗性筛选得到4株阳性转化子Tt-50D1至Tt-50D4。通过PCR鉴定,证明pTOB104已插入黑暗链霉菌Tt-49基因组的目标位点。松弛培养后,筛选得到双交换菌株,命名为Tt-50(ΔtobX-Z)。妥布霉素阻断载体的构建获得良好的预期效果。