目的：观察Wnt/β-catenin信号通路是否在体外以外源性Wnt3a持续作用小鼠胚胎干细胞后被激活，并进一步调控该通路下游基因的表达。方法应用外源性Wnt3a持续作用ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞21　d，通过细胞免疫荧光及Western　Blotting检测细胞内β-catenin蛋白，以观察该蛋白的胞内积聚情况；同时QRT-PCR检测WNT下游靶标基因的表达量，采用完全随机F检验并用LSD法进行两两比较，来确定经典WNT/β-catenin信号通路是否被激活。结果　ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞经Wnt3a连续培养21　d后，β-catenin蛋白的细胞荧光明显较强，而对照组中的荧光强度较弱，说明细胞内β-catenin蛋白没有被降解而是在胞内大量积累；Western　Blotting检测结果显示Wnt3a连续培养21　d后ES-E14TG2a细胞内β-catenin蛋白条带明显比空白对照的蛋白条带粗；ES-E14TG2a细胞经wnt3a培养后Pitx2、Frizzled、Sox17的表达量均持续上升，Pitx2在培养7　d、14　d、21　d分别为4.17±0.20、7.27±0.35、8.59±0.21（F=222.757，P=0.000）；Frizzled在培养7　d、14　d、21　d分别为1.01±0.06、2.93±0.22、5.44±0.30（F=302.703，P=0.000）；Sox17在培养7　d、14　d、21　d分别为8.45±0.41、18.35±0.17、34.93±0.16（F=7217.083，P=0.000）；Oct4培养到7　d、14　d的表达量持续增加分别为1.22±0.21、1.56±0.04，而连续培养21　d后Oct4基因的表达量下降为1.15±0.07（F=8.827，P=0.016）。结论　Wnt3a持续作用可激活Wnt/β-catenin信号通路，并调控下游基因的表达。