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李孔翰 (李孔翰.) [1] | 陈玲琳 (陈玲琳.) [2] | 周建森 (周建森.) [3] | 刘树滔 (刘树滔.) [4]

Indexed by:

CQVIP PKU CSCD

Abstract:

TAT-SOD是TAT蛋白转导结构域与SOD的融合蛋白质。作者以2007年构建的产TATSOD重组毕赤酵母菌为出发菌株,通过摇瓶实验研究不同温度、初始pH、诱导剂浓度等因素对蛋白质表达的影响。通过比色分析法测定菌体浓度、超氧阴离子自由基清除法测定酶活、SDSPAGE分析目的蛋白质TAT-SOD的浓度;并采用定量PCR法分析表达菌株的目的基因的mRNA变化规律,从而研究长期保藏重组毕赤酵母菌株表达TAT-SOD的适合性及其条件优化。研究结果表明,摇瓶发酵的最佳条件下(YPDM培养基,体积分数1.0%诱导剂浓度,诱导温度30.0℃,初始p H值7.0),发酵液上清酶活水平为753 U/mL,是未优化初始酶活水平的5.1倍,其中pH值优化使TAT-SOD表达水平提高到原始值的3.4倍。7.0的初始诱导pH值的mRNA水平是对照组pH 4.0的3.5倍。这些结果说明,长期保藏的重组毕赤酵母菌株仍然适合表达TAT-SOD,发酵条件会对毕赤酵母的TAT-SOD表达造成显著影响,影响表达水平的最主要因素是目的蛋白质的mRNA水平变化。

Keyword:

TAT-SOD 优化 发酵 基因表达 巴斯德毕赤酵母

Community:

  • [ 1 ] 福州大学生物工程研究所,福建福州350002

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Source :

食品与生物技术学报

ISSN: 1673-1689

Year: 2020

Issue: 8

Volume: 39

Page: 51-58

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