研究目的:基于单细胞转录组测序结果,挖掘KRAS　G12C突变NSCLC细胞耐药亚克隆进化机制。探讨核心耐药基因PERP在KRAS　G12C突变非小细胞肺癌(NSCLC)获得性耐药中的作用及分子机制,分析基因PERP的表达与患者耐药状态及临床特征的相关性,并评估PERP作为疗效预测生物标志物的潜力。材料与方法:构建对Sotorasib耐药的KRAS　G12C突变NSCLC细胞H358-SR,并通过单细胞转录组测序分析不同时间节点药物作用的H358及耐药细胞株H358-SR,筛选出早期适应性耐药细胞亚克隆群落和耐药核心亚克隆群落,再一步分析,获得导致的早期适应性耐药及耐药发生的关键基因。构建慢病毒敲除基因PERP的KRAS　G12C突变肺癌耐药细胞株H358-SR与Calu-SR,并利用CCk-8、克隆形成、Transwell迁移侵袭,凋亡等实验,验证PERP对于肿瘤恶性表征的影响,收集53例肺腺癌患者手术标本,利用RT-qPCR验证肺腺癌患者组织中PERP在癌组织与癌旁组织中m　RNA水平表达的差异。通过Co-IP-(LS/MS)和转录组测序预测与PERP可能结合的下游靶基因,并利用Co-IP、免疫荧光和双荧光素酶报告基因进行分子间互作验证,探索PERP与KRAS　G12C突变Sotorasib耐药肺癌细胞的关系。结果:通过单细胞转录组测序分析人肺腺癌细胞H358(KRAS　G12C抑制剂敏感株)与用Sotorasib治疗不同时间点的肺癌细胞模型,在亚克隆群中均出现早期适应性耐药。进一步利用单细胞测序分析Sotorasib耐药细胞H358-SR,在Sotorasib作用下,H358-SR也存在不同的亚克隆群。整合测序结果,绘制基因表达动态调控网络,获得耐药调控核心基因,即PERP。临床组织样本分析,PERP在肺腺癌组织的m　RNA水平表达显著高于癌旁组织,PERP高表达的肺腺癌患者生存期较短,但与临床病理特征的相关性不明显。体外实验表明:随药物Sotorasib作用时间延长,PERP蛋白表达量水平逐渐升高。PERP在耐药株H358-SR/Calu-1-SR表达明显上调。敲低PERP,耐药株H358-SR与Calu-1-SR不仅增殖、转移能力下降,而且对Sotorasib耐药性下降(药物敏感性上升),表明PERP在肺癌耐药中起关键作用。结论;PERP在肺腺癌中的异常表达,且与临床病理特征相关性不明显,PERP表达水...