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探索庆大霉素C-6＇＇位氨甲基化修饰作用的基因.首先构建用于genT基因缺失的同源重组质粒pFT104,利用接合转移导入绛红色小单孢菌G1008,筛选获得一株genT基因缺失工程菌GT106(△genT).其次构建用于GT106上genN基因缺失的重组质粒pFTN203,通过接合转移导入GT106,筛选获得一株工程菌GTN205(△genT+ genN).最后在genK基因已经明确为C-6＇＇位甲基化酶基因的基础上,在GTN205中敲除genK基因,筛选获得到一株工程菌GTNK308(△genT+ genN+ genK).工程菌发酵产物经质谱分析结果表明,与出发菌G1008相比,GT106组分未发生变化,而GTN205不再合成庆大霉素C1,产物主要积累在庆大霉素C1a和C2,GTNK308未检测到庆大霉素C2b.结果说明,genN基因缺失阻断了庆大霉素C1与C2b的合成,表明genN基因参与修饰绛红糖胺C-6＇＇位氨甲基化,而genT并不参与修饰绛红糖胺C-6＇＇位氨甲基化.
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中国药科大学学报
ISSN： 1000-5048
CN： 32-1157/R
Year： 2015
Issue： 1
Volume： 46
Page： 105-110
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