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本工作从中国临床最常见的5种荚膜血清型肺炎链球菌(FY01,FY05,FY6B,FY19F,FY23F)克隆获得编码PspA蛋白N端α-螺旋区的基因片段.分别将5种PspA基因片段克隆到表达载体pET-27b(+)上,成功构建重组质粒pET-pspA,转化大肠杆菌BL21(DE3).经乳糖诱导表达和亲和层析分离,获得高纯度重组蛋白.通过家族专属引物PCR的方法鉴定这5种荚膜血清型肺炎球菌的PspA蛋白所属家族,并进一步根据基因测序结果通过生物信息学方法鉴定了所属支系.FY01 rPspA、FY6B rPspA、FY19F rPspA同属于家族Ⅰ支系1,FY05 rPspA属于家族Ⅰ支系2,FY23F rPspA属于家族Ⅱ支系3.以FY01 rPspA免疫小鼠,在20 μg/mL免疫剂量时抗体滴度达到1:210000,显示了重组蛋白较好的免疫原性.Western blotting交叉免疫反应性研究表明,抗FY01rPspA抗血清与FY01 rPspA、FY6B rPspA和FY19F rPspA反应性较好,而与另外两种重组蛋白几乎无反应,提示PspA交叉免疫作用仅限于本支系内.动物保护实验表明,FY01 rPspA免疫的小鼠对FY6B、FY01两种菌的攻击具有较好的保护作用,对FY05、FY23F的攻击未见明显的保护作用.本研究成果对于研制高效肺炎球菌疫苗具有重要的指导意义.
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微生物学通报
ISSN： 0253-2654
CN： 11-1996/Q
Year： 2009
Issue： 6
Volume： 36
Page： 936-942
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