背景:醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)是醛脱氢酶家族(Aldehyde　Dehydrogenase)中的重要成员,在细胞代谢、解毒及信号传导中发挥关键作用,是肿瘤干细胞的重要标志物。表皮生长因子受体酪氨酸抑制剂(Epidermal　Growth　Factor　Receptor　Tyrosine　Kinase　Inhibitors,EGFR-TKIs)主要用于治疗具有EGFR基因敏感性突变的非小细胞肺癌,其中,奥希替尼(Osimertinib)作为第三代EGFR-TKI的代表性药物,在治疗过程中也常发生继发性耐药。过往的研究提示ALDH1A1可能在Osimertinib继发耐药中发挥重要的作用。目的:本研究构建对Osimertinib敏感的具有EGFR-19Del突变的肿瘤样本类器官,并且在体外诱导Osimertinib耐药,对比耐药前后类器官中ALDH1A1的表达差异,探讨ALDH1A1特异性抑制剂双硫仑(Disulfiram)逆转Osimertinib耐药的作用。方法:收集三例具有EGFR-19Del突变的非小细胞肺癌组织标本,采用体外3D培养方法构建类器官。采用HE染色、免疫组化和WES全外显子测序,验证类器官与亲本组织的一致性。采用剂量递增法诱导类器官对Osimertinib耐药,采用ATP法检测Osimertinib对诱导前后的类器官活性影响,计算IC50值。利用RT-qPCR和Western　blot方法分析诱导耐药前后类器官中ALDH1A1的mRNA和蛋白表达情况。ATP法评估ALDH1A1抑制剂Disulfiram与Osimertinib联合用药对对耐药类器官的杀伤效果。构建耐药类器官小鼠移植模型,隔天腹腔注射给予Osimertinib(5mg/kg)联合Disulfiram(2mg/kg),或单独Osimertinib(5mg/kg)用药。对比Disulfiram与Osimertinib联合用药和Osimertinib单独用药的抗肿瘤作用,HE染色评估药物的生物安全性。结果:HE染色、免疫组化检测以及WES全外显子测序结果表明,构建的类器官与对应的组织标本具有一致性。ATP法结果显示,Osimertinib作用72小时后的IC50值为3.665μM,提示药物敏感,而耐药诱导后的类器官的IC50值为8.190μM,表明Osimertinib耐药类器官构建成功。RT-qPCR和Western　blot...